一、前言

糖蛋白激素（glycoprotein hormones, GPHs）是人體內(nèi)一類重要的激素蛋白。本指導(dǎo)原則所述的糖蛋白激素產(chǎn)品結(jié)構(gòu)基本相似，是由一條保守的 α 鏈和一條激素特異性的 β 鏈通過非共價(jià)作用形成的異源二聚體，包括促卵泡激素（folliclestimulating hormone, FSH）、促黃體素（luteinizing hormone,LH）、絨毛膜促性腺激素（chorionic gonadotropin, CG）和促甲狀腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）等。糖蛋白激素通過作用于細(xì)胞膜上特定的富含亮氨酸的重復(fù) G 蛋白偶聯(lián)受體（leucine-rich repeat G protein-coupled receptors,LGRs），激活下游信號(hào)通路，調(diào)控多種腺體分泌，對人體生長發(fā)育具有重要調(diào)節(jié)作用，在臨床治療、輔助生殖等多方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。該類產(chǎn)品的糖基化修飾復(fù)雜，比活性高且唾液酸水平及糖型與生物學(xué)活性和代謝密切相關(guān)。藥審中心為進(jìn)一步指導(dǎo)和規(guī)范重組糖蛋白激素類藥物的研發(fā)和上市申請，制定本指導(dǎo)原則。該類產(chǎn)品應(yīng)符合《中華人民共和國藥品管理法》、《中華人民共和國藥品注冊管理辦法》、《中華人民共和國藥典》等相關(guān)法律法規(guī)。本指導(dǎo)原則僅基于當(dāng)前的科學(xué)認(rèn)知，申請人在進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)時(shí)可參照本指導(dǎo)原則開展研究，必要時(shí)也可綜合借鑒、參考國內(nèi)外其他相關(guān)指導(dǎo)原則。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和監(jiān)管知識(shí)經(jīng)驗(yàn)的積累，本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容將不斷完善與更新。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于采用重組技術(shù)表達(dá)和制備的糖蛋白激素類藥物，包括重組人促卵泡激素(rhFSH)、重組人促黃體素（rhLH)、重組人促甲狀腺激素(rhTSH)、重組人絨毛膜促性腺激素(rhCG)以及重組人促卵泡激素 C-端肽（rhFSHCarboxyl-terminal peptide，rhFSH-CTP）融合蛋白等。復(fù)方制劑、經(jīng)其他修飾或改構(gòu)設(shè)計(jì)的糖蛋白激素類產(chǎn)品以及天然原材料提取的糖蛋白激素類產(chǎn)品可酌情參考本指導(dǎo)原則的相關(guān)要求。

三、一般原則

重組糖蛋白激素類藥物的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制應(yīng)基于全面的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)評估，確定目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況和相關(guān)的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需重點(diǎn)關(guān)注 N-聚糖譜和唾液酸含量等與該類產(chǎn)品的生物學(xué)活性和藥代動(dòng)力學(xué)密切相關(guān)的質(zhì)量屬性以及解離亞基、氧化亞基等可能造成安全性風(fēng)險(xiǎn)的質(zhì)量屬性。應(yīng)根據(jù)“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”的理念充分開展工藝開發(fā)和表征研究，制定合理的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制策略，建立全過程質(zhì)量控制和全生命周期管理體系，確保產(chǎn)品安全有效、質(zhì)量可控。對于按照生物類似藥開發(fā)的重組糖蛋白激素類藥物，藥學(xué)研究還應(yīng)符合生物類似藥的相關(guān)要求。由于糖蛋白激素類藥物結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和糖基化異質(zhì)性特點(diǎn)，在進(jìn)行相似性評價(jià)時(shí)，應(yīng)保證可能影響生物學(xué)活性和藥代動(dòng)力學(xué)的主要糖基化種類和唾液酸水平（含量和分布）相似。對于藥學(xué)相似性評價(jià)中觀察到的微小質(zhì)量屬性差異，應(yīng)進(jìn)一步結(jié)合非臨床和臨床研究評估是否對產(chǎn)品安全性、有效性、免疫原性和代謝產(chǎn)生影響。

四、生產(chǎn)用原材料

（一）上游構(gòu)建和細(xì)胞庫的建立

重組糖蛋白激素類藥物的上游構(gòu)建和細(xì)胞庫應(yīng)符合《中國藥典》和 ICH 相關(guān)指導(dǎo)原則的相關(guān)要求。糖蛋白激素類藥物具有復(fù)雜的糖基化修飾和高水平的唾液酸含量，其糖基化修飾類型很大程度上取決于宿主細(xì)胞固有的糖基化能力（即宿主細(xì)胞內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶的功能專屬性和特異性），同時(shí)受細(xì)胞培養(yǎng)條件的影響。因此，上游構(gòu)建和細(xì)胞培養(yǎng)工藝的開發(fā)過程中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注可能影響糖基化修飾的方面，如宿主細(xì)胞的選擇、工程細(xì)胞的篩選及細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)鍵參數(shù)（如培養(yǎng)基、溫度）的影響。

1. 宿主細(xì)胞

重組糖蛋白激素類產(chǎn)品通常采用哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)目的蛋白正確折疊及準(zhǔn)確的翻譯后修飾，獲得與天然結(jié)構(gòu)和功能接近的目的蛋白。目前商業(yè)化生產(chǎn)所應(yīng)用的宿主細(xì)胞有中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞和人源細(xì)胞系。在糖蛋白激素類藥物開發(fā)過程中需要關(guān)注種屬來源不同導(dǎo)致的糖基化修飾類型及水平的差異及不同的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特性。例如，CHO 細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)中不存在 N乙酰半乳糖胺及其硫酸化衍生物，僅含有 α 2，3-連接的唾液酸，具有低水平的 N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（NGNA）。人源細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物通常含有 α 2，3-連接和 α 2，6-連接的唾液酸，僅包含 N-乙酰神經(jīng)氨酸（NANA）唾液酸結(jié)構(gòu)，并且具有更高水平的四天線分支和唾液酸化程度。用于構(gòu)建生產(chǎn)用細(xì)胞系的宿主細(xì)胞，應(yīng)具有清晰的細(xì)胞來源證明及傳代操作馴化歷史。如對宿主細(xì)胞進(jìn)行了基因改造（如糖基化路徑改造），應(yīng)說明細(xì)胞引入、改造或敲除基因的理由和依據(jù)，評估改造過程對細(xì)胞正常生理功能、代謝過程、基因穩(wěn)定性和表達(dá)產(chǎn)物的影響，關(guān)注改造過程可能引入的安全性風(fēng)險(xiǎn)。

2. 目的基因和表達(dá)載體

重組糖蛋白激素類藥物的氨基酸序列通常與天然來源糖蛋白激素的氨基酸序列一致。rhFSH-CTP 在天然氨基酸序列上進(jìn)行了改構(gòu)，通過在 FSH的β亞基C末端融合一段富含O糖的 hCGβ亞基CTP蛋白片段來延長體內(nèi)循環(huán)半衰期。應(yīng)明確目的基因序列的來源，提供目的基因序列和氨基酸序列，說明是否與天然來源糖蛋白激素的氨基酸序列一致。如在天然序列基礎(chǔ)上進(jìn)行氨基酸位點(diǎn)突變、增加或改造序列及結(jié)構(gòu)域等，應(yīng)說明改造的目的和依據(jù)。應(yīng)提供表達(dá)載體的構(gòu)建過程、主要控制元件及其功能信息，對表達(dá)載體插入基因進(jìn)行酶切鑒定和測序確認(rèn)。

3. 工程細(xì)胞的構(gòu)建篩選

在工程細(xì)胞的篩選過程中，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注不同單克隆細(xì)胞株之間表達(dá)產(chǎn)物的質(zhì)量差異，如整體及各糖基化位點(diǎn)上糖型分布比例與等電點(diǎn)的差異。在開展相應(yīng)充分研究基礎(chǔ)上，應(yīng)在申報(bào)資料中詳細(xì)說明工程細(xì)胞的構(gòu)建過程，并提供單克隆性相關(guān)證明。

4. 細(xì)胞庫的建立及檢定

為保證生產(chǎn)的可持續(xù)性和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性，細(xì)胞庫應(yīng)在符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的條件下制備，檢定合格后用于生產(chǎn)。細(xì)胞庫的檢定應(yīng)符合《中國藥典》和 ICH 指導(dǎo)原則的相關(guān)要求。細(xì)胞庫的病毒安全性檢測應(yīng)以細(xì)胞系來源為基礎(chǔ)進(jìn)行廣泛的檢測，包括內(nèi)外源病毒、種屬特異性病毒和細(xì)胞庫建立過程中可能從原材料中引入的病毒。傳代穩(wěn)定性研究應(yīng)模擬商業(yè)化實(shí)際生產(chǎn)條件開展，確保細(xì)胞能夠持續(xù)穩(wěn)定地生產(chǎn)具有預(yù)期質(zhì)量的目標(biāo)蛋白，并根據(jù)研究結(jié)果合理擬定細(xì)胞庫的體外限傳代次。

（二）其他生產(chǎn)用原材料

糖蛋白激素類產(chǎn)品的生產(chǎn)用原材料應(yīng)符合《中國藥典》的相關(guān)要求。原材料的選用應(yīng)基于先驗(yàn)知識(shí)或平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評估對生產(chǎn)用原材料使用的必要性、合理性和安全性進(jìn)行分析，并在申報(bào)資料中提供原材料的來源、主要成分、使用階段、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等信息，根據(jù)原材料對產(chǎn)品質(zhì)量的影響進(jìn)行分級(jí)管理，建立合理的控制策略，加強(qiáng)對供應(yīng)商的管理和審計(jì)。生產(chǎn)過程中應(yīng)盡量避免使用牛血清、豬胰蛋白酶等動(dòng)物來源或人源的原材料。

五、生產(chǎn)工藝

（一）原液

重組糖蛋白激素類產(chǎn)品的工藝開發(fā)應(yīng)以生產(chǎn)具有所需質(zhì)量屬性的糖蛋白激素為目標(biāo)，遵循“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”的理念，深入探索工藝參數(shù)與質(zhì)量屬性的關(guān)系，確定關(guān)鍵工藝參數(shù)和過程中控制，建立基于風(fēng)險(xiǎn)和科學(xué)的整體控制策略。上游細(xì)胞培養(yǎng)工藝的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件和下游純化工藝的層析介質(zhì)選擇等均會(huì)對糖蛋白激素的糖基化修飾類型和比例有較大影響，因此在工藝開發(fā)過程中應(yīng)予以重點(diǎn)關(guān)注。此外，還需關(guān)注工藝條件對解離亞基、氧化亞基、聚體和片段等產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)水平的影響。對于生產(chǎn)過程中潛在的工藝相關(guān)雜質(zhì)，包括親和配基殘留、宿主蛋白殘留、宿主 DNA 殘留、工藝添加物等，應(yīng)充分評估純化工藝對相關(guān)雜質(zhì)的去除能力，結(jié)合雜質(zhì)安全性評估結(jié)果適當(dāng)在工藝過程或放行檢測中予以控制。由于糖蛋白激素類產(chǎn)品對低 pH 的敏感性，純化工藝中病毒清除步驟應(yīng)考慮滅活 pH 的選擇對產(chǎn)品結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響。若低 pH 病毒滅活工藝無法滿足病毒滅活要求，可采用其他適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行，以實(shí)現(xiàn)純化工藝的整體病毒清除率。考慮到氧化、溫度變化等外部因素和微生物污染風(fēng)險(xiǎn)對中間產(chǎn)物質(zhì)量的影響，糖蛋白激素類產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)物應(yīng)盡可能避免長時(shí)間放置。對于需要暫存的中間產(chǎn)物，應(yīng)規(guī)范開展中間產(chǎn)物暫存穩(wěn)定性研究，以理化穩(wěn)定性研究和微生物安全性考察中的較短時(shí)限確定最終保持時(shí)限。理化穩(wěn)定性研究應(yīng)包含對關(guān)鍵質(zhì)量屬性（如純度和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)）的考察。

重組糖蛋白激素類產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證要求與治療用重組蛋白類產(chǎn)品基本相同。原液的生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)過充分驗(yàn)證以證明具有可控性和穩(wěn)健性。原液的工藝驗(yàn)證還應(yīng)包括病毒滅活去除驗(yàn)證、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)的去除、中間產(chǎn)物暫存時(shí)間驗(yàn)證、培養(yǎng)基/緩沖液制備和放置條件驗(yàn)證、層析介質(zhì)和過濾/超濾膜包的使用壽命驗(yàn)證等內(nèi)容。對于生產(chǎn)過程中使用的耗材（如一次性反應(yīng)袋、層析介質(zhì)、過濾組件）和儲(chǔ)存容器，應(yīng)結(jié)合材質(zhì)、使用階段等因素綜合評估安全性風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)開展相容性研究。如純化工藝中使用了親和層析填料，應(yīng)評估親和配基脫落風(fēng)險(xiǎn)及工藝去除能力，結(jié)合免疫原性和安全性風(fēng)險(xiǎn)確定是否需要將親和配基殘留量納入原液放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。如親和層析填料為自行生產(chǎn)，應(yīng)提供其工藝、質(zhì)量和穩(wěn)定性研究資料，充分評估使用風(fēng)險(xiǎn)并制定合理的控制策略，重點(diǎn)關(guān)注自產(chǎn)親和層析填料的質(zhì)量一致性、微生物安全性控制和親和配基殘留量的安全性評價(jià)，并提供支持性研究數(shù)據(jù)。

（二）制劑

1. 處方

重組糖蛋白激素類產(chǎn)品在一定的外部環(huán)境條件下（如高溫、光照、氧化等），可能發(fā)生亞基解離、聚集和氧化，進(jìn)而影響其生物學(xué)活性和安全性。制劑的處方通常包含表面活性劑、蛋白穩(wěn)定劑、抗氧化劑、緩沖劑和 pH 調(diào)節(jié)劑等，制劑處方在維持蛋白穩(wěn)定和抗氧化保護(hù)中發(fā)揮著重要作用。應(yīng)根據(jù)處方篩選、穩(wěn)定性研究和方便臨床使用等因素綜合考慮開發(fā)合適的劑型。雖然糖蛋白激素類產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)相似，但確保每種產(chǎn)品穩(wěn)定性的最佳穩(wěn)定劑和緩沖系統(tǒng)可能不同，因此需要針對特定目標(biāo)產(chǎn)品進(jìn)行篩選和驗(yàn)證。輔料的使用應(yīng)符合《中國藥典》的相關(guān)規(guī)定。對于《中國藥典》中未收載的輔料，可以參考其他國家藥典或根據(jù)其與制劑質(zhì)量屬性的關(guān)系建立相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對輔料質(zhì)量進(jìn)行有效的控制。

對于復(fù)方制劑，需在結(jié)合臨床實(shí)際應(yīng)用的基礎(chǔ)上，明確不同活性組分的比例設(shè)定的合理性。開展不同組分與輔料、兩種或多種組分之間的相互作用研究，明確是否會(huì)對各組分的質(zhì)量和穩(wěn)定性產(chǎn)生影響。對于多劑量產(chǎn)品中抑菌劑種類和含量的確定，應(yīng)參照《中國藥典》規(guī)范開展研究，結(jié)合穩(wěn)定性研究結(jié)果、多劑量使用時(shí)可能發(fā)生的污染和開啟后推薦的最長使用時(shí)間來進(jìn)行綜合評估，在保證抑菌效力的前提下，降低抑菌劑使用量。原則上，應(yīng)采用使制劑抑菌效力達(dá)到《中國藥典》規(guī)定的 A級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的最低添加量。

2. 生產(chǎn)工藝

制劑生產(chǎn)工藝一般包括原液解凍、半成品配制、無菌過濾、灌裝等，后續(xù)工藝步驟因其劑型差異而有所不同。生產(chǎn)過程中應(yīng)盡量避免過量投料。如生產(chǎn)過程需過量投料，應(yīng)說明過量投料的必要性和超出量的合理性，結(jié)合生產(chǎn)工藝、包裝材料和容器的機(jī)械損失和吸附損失等開展過量投料的相關(guān)驗(yàn)證。如需對原液進(jìn)行稀釋或加入其他輔料制成半成品，應(yīng)確定半成品的質(zhì)量控制要求，納入細(xì)菌內(nèi)毒素、無菌檢查、蛋白質(zhì)含量等檢項(xiàng)。制劑的生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)過充分驗(yàn)證以證明具有可控性和穩(wěn)健性。鑒于糖蛋白激素的比活性高且主藥濃度低，為確保投料量準(zhǔn)確性和質(zhì)量一致性，需對原液解凍及混勻工藝、制劑配制工藝（輔料加料順序、配液混合均勻性）、灌裝均勻性、凍干均一性等進(jìn)行驗(yàn)證，還應(yīng)進(jìn)行無菌工藝驗(yàn)證、過濾器的驗(yàn)證、凍干工藝驗(yàn)證（如適用）、運(yùn)輸確認(rèn)、生產(chǎn)接觸組件相容性研究和評估等。對于在生產(chǎn)線上組裝成注射筆的產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行注射筆組裝工藝驗(yàn)證。

六、質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

相比于一般的重組 DNA 技術(shù)藥物，重組糖蛋白激素類藥物的結(jié)構(gòu)和糖基化修飾更加復(fù)雜。糖基化修飾對該類藥物的體內(nèi)受體結(jié)合、信號(hào)傳導(dǎo)、代謝清除和發(fā)揮生物學(xué)活性起關(guān)鍵作用。申請人應(yīng)充分評估重組糖蛋白激素產(chǎn)品的質(zhì)量屬性對臨床安全性和有效性的潛在影響，確定關(guān)鍵質(zhì)量屬性，建立起全面的基于風(fēng)險(xiǎn)的質(zhì)量控制策略，將理化分析方法與生物學(xué)活性分析方法充分結(jié)合起來，保證全生命周期質(zhì)量可控。

（一）質(zhì)量研究

應(yīng)采用先進(jìn)的分析技術(shù)手段進(jìn)行全面的結(jié)構(gòu)鑒定和特性分析，通常包含一級(jí)結(jié)構(gòu)、高級(jí)結(jié)構(gòu)、二硫鍵、糖基化修飾等。質(zhì)量研究還包括鑒別、純度和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（聚體和片段、氧化產(chǎn)物、解離亞基）、等電點(diǎn)、蛋白質(zhì)含量、生物學(xué)活性等內(nèi)容。如按新藥開發(fā)，應(yīng)與內(nèi)源性糖蛋白激素和/或其他已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)活性相關(guān)對比研究，并評估差異可能對安全性、有效性和藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生的影響。

1. 一級(jí)結(jié)構(gòu)

一級(jí)結(jié)構(gòu)的研究通常包括完整分子量、脫糖分子量、氨基酸序列測定、肽指紋圖譜、N 端/C 端序列和異質(zhì)性分析、翻譯后修飾。糖蛋白激素類藥物的 α 亞基和 β 亞基存在一定比例的 N 端和 C 端不均一性，應(yīng)分別對 α 亞基和 β 亞基的N 端/C 端缺失比例進(jìn)行研究，充分評估 N 端/C 端異質(zhì)性對生物學(xué)活性和安全性的影響。翻譯后修飾可能包括氧化、脫酰胺、天冬氨酸異構(gòu)化、琥珀酰亞胺化、糖化等，翻譯后修飾位點(diǎn)和比例應(yīng)具有批間一致性。

2. 高級(jí)結(jié)構(gòu)

高級(jí)結(jié)構(gòu)的研究通常包括二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。可用于高級(jí)結(jié)構(gòu)研究的分析方法包括圓二色譜、差示掃描量熱分析、熒光光譜等。

3. 二硫鍵

由于半胱氨酸在序列中分布較近及高糖基化水平結(jié)合的復(fù)雜性，該類藥物的二硫鍵分析存在一定難度。應(yīng)盡可能采用先進(jìn)的技術(shù)手段對二硫鍵配對情況進(jìn)行分析，必要時(shí)可采用其他方法作為補(bǔ)充，如提供缺乏游離巰基的證明或通過生物學(xué)活性證明其正確的折疊結(jié)構(gòu)。

4. 糖基化修飾

糖蛋白激素類藥物的 N-聚糖主要是復(fù)合型聚糖，一般具有兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)糖基化分支。N-聚糖的復(fù)雜程度與核心甘露糖上 N-乙酰葡萄糖胺的分支數(shù)量、碳水化合物殘基、是否具有巖藻糖基化修飾以及末端是否存在唾液酸化等因素相關(guān)。N-糖基化修飾的研究通常應(yīng)包括 N 糖基化位點(diǎn)、N 糖結(jié)構(gòu)分析、單糖組成分析、唾液酸含量和分布（Z 值）等。α亞基和β亞基的糖基化位點(diǎn)均可能存在未完全糖基化的現(xiàn)象，而 β 亞基的不完全糖基化可能影響體內(nèi)代謝和生物學(xué)活性，因此應(yīng)對 β 亞基的 N-糖基化位點(diǎn)占有率進(jìn)行分析，必要時(shí)納入標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行控制。糖蛋白激素類產(chǎn)品含多個(gè)糖基化位點(diǎn)且在每個(gè)糖基化位點(diǎn)具有顯著的異質(zhì)性，鼓勵(lì)采用先進(jìn)的技術(shù)對α和β亞基不同位點(diǎn)的具體糖基化修飾類型進(jìn)行鑒定，并結(jié)合體內(nèi)生物作用和功能進(jìn)行分析。部分糖蛋白激素類藥物（如 rhCG 和 rhFSH-CTP）的β亞基羧基末端肽含有4 - 6個(gè)具有豐富唾液酸的 O 糖修飾，可增加唾液酸水平和蛋白質(zhì)的負(fù)電荷，降低腎小球過濾并減少受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，從而通過延緩半衰期來提高體內(nèi)生物活性。O-糖基化修飾鑒定通常包括 O 糖基化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)占有率、O 糖結(jié)構(gòu)分析、單糖組成分析等。由于缺乏有效的酶切手段以及固有的結(jié)構(gòu)多樣性，O 糖的系統(tǒng)性分析存在難度，鼓勵(lì)盡可能使用先進(jìn)的分析方法進(jìn)行 O 糖修飾的相關(guān)研究。 

5. 純度和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)

糖蛋白激素類藥物的 α 亞基和 β 亞基通過非共價(jià)鍵結(jié)合，在一定的外部環(huán)境條件下（高溫、光照、反復(fù)凍融、振動(dòng)、氧化、酸堿等）可能發(fā)生解離、氧化和聚集，形成解離亞基、氧化亞基、聚集體等產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。應(yīng)采用富集、分離的樣品（如強(qiáng)制降解樣品等）進(jìn)行產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的表征和生物學(xué)活性研究，評估對臨床安全性和有效性的影響。純度檢查是質(zhì)量研究的重要指標(biāo)之一，通常選用兩種或兩種以上不同原理的方法進(jìn)行測定。 

聚集體和解離亞基：聚集體可能導(dǎo)致免疫原性升高，α 亞基和 β 亞基解離會(huì)造成生物學(xué)活性降低并可能產(chǎn)生其他非預(yù)期的生物學(xué)功能。因此，聚集體和解離亞基含量是質(zhì)量研究和穩(wěn)定性評價(jià)的重要指標(biāo)。聚集體和解離亞基分析方法（例如 SEC-HPLC、還原/非還原 CE-SDS）的選擇應(yīng)綜合分析方法的靈敏度及成品輔料干擾情況確定。氧化亞基：糖蛋白激素類產(chǎn)品的 α 亞基和 β 亞基氨基酸序列中的甲硫氨酸在細(xì)胞培養(yǎng)、純化工藝過程中易于被氧化，而且無法通過純化工藝完全去除。制劑的生產(chǎn)和儲(chǔ)存過程也可能發(fā)生氧化。氧化產(chǎn)物是一種非常重要的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，對免疫原性及生物學(xué)活性存在潛在影響。可采用RP-HPLC 等分析方法對單獨(dú)氧化亞基和/或總氧化亞基含量進(jìn)行檢測。

6. 蛋白質(zhì)含量

根據(jù)糖蛋白激素類產(chǎn)品的性質(zhì)，蛋白質(zhì)含量可選用高效液相色譜法、紫外-可見分光光度法、凱氏定氮法等方法進(jìn)行測定，三種方法均適用于原液含量測定。因成品蛋白濃度低和輔料干擾，從方法專屬性和適用性的角度推薦使用高效液相色譜法。隨著技術(shù)的發(fā)展，也可以采用其他適用的分析方法。 

7. 等電點(diǎn)和電荷異質(zhì)性

糖蛋白激素的電荷異質(zhì)性受其唾液酸修飾的影響呈現(xiàn)出多條帶分布，可以通過等電聚焦電泳（IEF）、毛細(xì)管等電聚焦電泳（cIEF）、全柱成像毛細(xì)管等電聚焦電泳（icIEF）或毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）對圖譜和主要條帶進(jìn)行控制。基于分析方法的迭代更新，現(xiàn)階段鼓勵(lì)采用 cIEF/icIEF/CZE 替代IEF 進(jìn)行電荷異質(zhì)性的鑒定和控制。

8. 生物學(xué)活性

糖蛋白激素類藥物生物學(xué)活性的測定方法包括體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)和體外細(xì)胞試驗(yàn)。分析方法的選擇應(yīng)根據(jù)《中國藥典》要求、藥物作用機(jī)制、體內(nèi)藥效學(xué)特點(diǎn)和方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果等綜合考慮。由于糖基化修飾對該類藥物發(fā)揮體內(nèi)生物活性至關(guān)重要，因此還應(yīng)在原液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用其他分析方法對 N聚糖譜和電荷異質(zhì)性進(jìn)行控制，建立全面的質(zhì)量控制策略。當(dāng)采用體外細(xì)胞法代替體內(nèi)動(dòng)物法進(jìn)行活性檢測時(shí)，應(yīng)規(guī)范進(jìn)行變更前后分析方法橋接研究，采用不同的產(chǎn)品變體（去唾液酸化變體、強(qiáng)制降解樣品、不同唾液酸化水平的變體等）進(jìn)行體內(nèi)外活性檢測的對比研究并對結(jié)果進(jìn)行分析。應(yīng)開展相關(guān)研究并提供支持性數(shù)據(jù)，以證明體外活性分析方法能夠準(zhǔn)確可靠地分析識(shí)別出可能影響安全性和有效性的潛在質(zhì)量屬性變化，包括生產(chǎn)工藝變異性導(dǎo)致的質(zhì)量波動(dòng)（如唾液酸含量和分布）和加速/強(qiáng)制降解穩(wěn)定性研究中可能出現(xiàn)的質(zhì)量異常情況（如聚集、降解、氧化等）。

（二）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

糖蛋白激素類產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)建立在充分質(zhì)量研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合《中國藥典》要求、藥物的特點(diǎn)、質(zhì)量屬性的風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果和工藝控制能力等因素綜合制定。原液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在外觀、鑒別、等電點(diǎn)、蛋白質(zhì)含量、生物學(xué)活性、工藝相關(guān)雜質(zhì)、安全性檢查等重組蛋白類產(chǎn)品常規(guī)檢項(xiàng)的基礎(chǔ)上，還應(yīng)納入糖基化修飾相關(guān)檢項(xiàng)（如唾液酸含量、N-聚糖譜、Z 值）、β亞基 N 端缺失比、純度和產(chǎn)品特異的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（單獨(dú)氧化亞基和/或總氧化亞基、解離亞基、聚集體等）。制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)制劑劑型和處方的不同，還應(yīng)納入 pH值、滲透壓摩爾濃度、不溶性微粒、可見異物、裝量差異、水分、復(fù)溶時(shí)間、關(guān)鍵輔料含量等檢項(xiàng)。對于預(yù)填充注射筆包裝的注射劑，應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對劑量準(zhǔn)確度進(jìn)行控制。對于復(fù)方制劑，應(yīng)建立分析方法檢測制劑中每個(gè)活性成分的含量和生物學(xué)活性，并盡可能確保復(fù)方制劑中的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如解離亞基、聚集體、氧化亞基）被有效的分離和檢測，確認(rèn)沒有對安全性和有效性產(chǎn)生不良影響的新雜質(zhì)出現(xiàn)。用于質(zhì)量控制的分析方法應(yīng)滿足檢測要求并經(jīng)過全面的方法學(xué)驗(yàn)證/確認(rèn)。應(yīng)根據(jù)臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)、生產(chǎn)工藝能力、分析方法變異性及穩(wěn)定性研究等合理擬定原液和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可接受范圍，并充分說明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的依據(jù)。為確保檢測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，應(yīng)規(guī)范建立理化和活性標(biāo)準(zhǔn)品用于鑒別、理化和生物學(xué)活性測定，并完成檢驗(yàn)、標(biāo)定和穩(wěn)定性研究。對于已有國際/國家標(biāo)準(zhǔn)品的品種，企業(yè)工作標(biāo)準(zhǔn)品必須經(jīng)國際/國家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定后方能使用。

七、穩(wěn)定性研究

應(yīng)參照已頒布的穩(wěn)定性研究的相關(guān)指導(dǎo)原則，采用代表性批次規(guī)范開展原液和制劑的穩(wěn)定性研究。穩(wěn)定性研究一般包括影響因素/強(qiáng)制降解穩(wěn)定性、加速穩(wěn)定性和長期穩(wěn)定性研究，穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)可以支持原液和制劑有效期及保存條件的制定。此外，還應(yīng)開展運(yùn)輸穩(wěn)定性研究，根據(jù)研究情況制定原液和制劑的運(yùn)輸條件（包括運(yùn)輸路線、交通工具、時(shí)間、溫度條件等）。對于臨床使用前需要復(fù)溶、稀釋或混合的制劑，應(yīng)規(guī)范開展使用中穩(wěn)定性研究，對配制后的理化特性和微生物安全性（細(xì)菌內(nèi)毒素、無菌）進(jìn)行考察，確保臨床配制過程未對質(zhì)量產(chǎn)生不良影響等。多劑量產(chǎn)品應(yīng)開展有效期末使用中穩(wěn)定性研究，證明產(chǎn)品在實(shí)際多次使用過程中的質(zhì)量一致性。在設(shè)計(jì)模擬使用穩(wěn)定性研究方案時(shí)，應(yīng)采用臨床實(shí)際的最差使用條件開展研究。多劑量產(chǎn)品中一般含有抑菌劑，為驗(yàn)證產(chǎn)品在長期儲(chǔ)存和模擬使用條件下防止微生物污染的有效性，應(yīng)在長期穩(wěn)定性研究的關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)和模擬使用條件下，參照《中國藥典》開展抑菌效力檢查。

八、包裝材料和容器

為避免直接接觸的包裝材料和容器對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生非預(yù)期影響，應(yīng)規(guī)范開展包裝系統(tǒng)相容性研究和密閉完整性研究。重組糖蛋白激素類藥物通常對硅油敏感，易發(fā)生亞基解離進(jìn)而影響產(chǎn)品質(zhì)量。對于使用硅油進(jìn)行硅化處理的預(yù)填充包裝制劑，應(yīng)關(guān)注硅油來源及質(zhì)量控制，結(jié)合臨床使用充分評估硅油對質(zhì)量和安全性的影響。產(chǎn)品所使用的多次給藥裝置應(yīng)滿足給藥的安全性和便利性要求。申請人應(yīng)評估注射筆和筆芯（卡式瓶）的適配性，并開展相應(yīng)的劑量準(zhǔn)確度和注射筆功能性研究。

九、參考文獻(xiàn)

1. 國家藥典委. 《中華人民共和國藥典》（2025 版）

2. 國家食品藥品監(jiān)督管理局. 生物制品質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)一般原則（2007）

3. 國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 生物類似藥研發(fā)與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）（2015）

4. 國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）（2015）

5. 國家藥品監(jiān)督管理局.生物類似藥相似性評價(jià)和適應(yīng)癥外推技術(shù)指導(dǎo)原則（2021）

6. 國家藥品監(jiān)督管理局.生物類似藥藥學(xué)相似性研究的問題與解答（2025）

7. ICH Q8. Pharmaceutical Development（2009）

8. ICH Q9. Quality Risk Management（2005）

9. ICH Q12. Technical and regulatory considerations for pharmaceutical product lifecycle management（2019）

來源：CDE

原文下載：重組糖蛋白激素類產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則.pdf